摘要：目的： 研究 悦肝胶囊对酒精性肝损伤小鼠肝脏的保护作用。 方法 ：KM种小鼠随机分正常组、模型组（56度二锅头白酒14 ml?kg-1?d-1）、东宝肝泰组（0.8 g?kg-1?d-1，56度二锅头白酒14 ml?kg-1?d-1）、悦肝胶囊大剂量组（10 g?kg-1?d-1，56度二锅头白酒14 ml?kg-1?d-1）、悦肝胶囊中剂量组（5 g?kg-1?d-1，56度二锅头白酒14 m1?kg-1?d-1）、悦肝胶囊小剂量组（2.5 g?kg-1?d-1，56度二锅头白酒14 ml?kg-1?d-1）、连续灌胃6周，眼球采血，进行生化测定丙氨酸转移酶（ALT）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）；取出肝左叶按组织化学方法观察琥珀酸脱氢酶（SDH）、酸性磷酸酶（ACP）活性，油红O法显示中性脂肪。结果：悦肝胶囊可明显抑制ALT活性巴（P＜0.05），降低TG、MDA含量（P＜0.05），提高SOD活性（P＜0.05）；组织化学观察表明，损伤组SDH活性下降，ACP活性增高，脂滴增多。悦肝胶囊可减轻上述肝损伤程度。结论：悦肝胶囊对酒精中毒小鼠肝脏损伤有一定的防治作用。

　　关键词：悦肝胶囊；  酒精性肝损伤；  组织化学；  生物化学

　　据 文献 报道［1］，酒精性肝病的发病率与酒精消耗平行，饮酒量越大其发病率越高，酒精中毒对肝脏的损害较其它组织、器官更严重，悦肝胶囊主要由葛根、丹参、西洋参、麦冬等中药组成。临床资料表明此方具有改善肝炎患者症状、恢复肝功能、调节免疫功能的作用。为探讨悦肝胶囊的作用机理本实验观察了悦肝胶囊对酒精所致的肝损伤小鼠血清氧自由基相关指标及其对肝细胞酶活性变化的 影响 。

　　1  材料和方法

　　1.1  实验动物KM种雄性小鼠，体重为（20±2）g，延边大学医学院实验动物科提供，于室温18～20 ℃普通饲料喂养，自由摄食、饮水。动物合格证：SCXK2002-2005。

　　1.2  药物与试剂悦肝胶囊由延边大学长白山天然药物研究中心提供。制备方法：葛根30 g,丹参30 g,麦冬20 g,西洋参20 g,加蒸馏水煮1 h后过滤，滤出液备用，把原药再煮1 h后过滤，把第1次滤出液和第2次滤出液混合，浓缩成100 ml即得。实验用酒为北京二锅头酒厂生产的56度二锅头白酒。东宝肝泰为 中国 通化东宝药业股份有限公司产品。ALT，TG试剂盒为中生北控生物 科技 有限公司产品。SOD，MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。

　　1.3  主要仪器日本OLYMPUS万能显微镜，芬兰MK-3酶标仪，德国ZKl5超低温高速离心机，北京天地百年科技有限公司TD一2000真彩色病理细胞显微 分析 系统，美国Starlet221恒冷箱切片机。

　　1.4  方法将60只KM种小鼠随机分为正常组、酒精损伤组、东宝肝泰组、悦肝胶囊大剂量组、悦肝胶囊中剂量组、悦肝胶囊小剂量组。药物对照组给予0.8 g/kg体重东宝肝泰，药物组分别给予10，5，2.5 g/kg  体重悦肝胶囊，正常组、模型组以等体积生理盐水灌胃，30 min 后除正常组外其余组均给予56度二锅头白酒14 ml/kg体重灌胃。小鼠连续灌胃6周，于末次灌胃24h  ，眼球采血，分离血清，用酶标仪测SOD活性和MDA含量；快速断头处死小鼠，取出肝左叶进行组织化学观察。

　　1.5  观察指标ALT活性采用赖氏法；TG含量按酶比色法；血清SOD活性按黄嘌呤氧化酶法；MDA含量按硫代巴比妥酸法。

　　肝组织冰冻切片，切片厚约8 μm，进行组织化学染色。亚铁氰化钾法显示琥珀酸脱氢酶，Gomori法显示酸性磷酸酶活性，油红O法显示中性脂肪，在万能相差显微镜下观察并拍片。

　　1.6  统计学方法所有数据以±s表示， 应用 SPSS10.0统计软件进行方差分析。

　　2  结果

　　2.1  组织化学

　　2.1.1  琥珀酸脱氢酶（SDH）染色结果SDH活性在光镜下显示为紫蓝色颗粒。正常组SDH活性强，颗粒多，染色深。模型组SDH活性减弱，紫蓝色颗粒减少，染色浅。药物对照组及药物组SDH活性均较模型组增强，颗粒多，染色深。

　　2.1.2  酸性磷酸酶（ACP）染色结果ACP活性呈棕黑色沉淀。正常组ACP活性弱，酶颗粒染色较浅，均匀一致。模型组ACP活性增强，颗粒多，染色深。药物对照组与药物组ACP活性均减弱，颗粒染色较浅。

　　2.1.3  中性脂肪用油红O法染色，在正常小鼠肝细胞内可见少量桔红色的圆形脂滴，而模型组小鼠肝细胞内显示较多的大小不一的圆形脂滴。悦肝胶囊组脂滴减少。

　　2.2  血清学改变见表1～2。

　　表1  各组血清ALT，TG比较（略）

　　与正常组比较，#P＜0.01，与损伤组比较*P＜0.01

　　表2  各组血清SOD活性和MDA含量比较（略）

　　与正常组比较，*P＜0.05，与模型组比较，#P＜0.05

　　3  讨论

　　酒精性肝病是由于长期大量饮酒所致的肝脏疾病。 现代 医学认为其可能的发病机制为机体的免疫反应异常，自由基的产生和脂质过氧化，生物膜的损伤，肝细胞代谢紊乱等［2］。

　　在本实验中观察到酒精性肝损伤时肝血清内ALT活性和TG含量有明显变化，其酶活性和含量变化可反映酒精导致肝损伤的严重程度。酒精中毒引起的肝损伤与酒精的代谢产物乙醛的直接毒性有关［3～4］，乙醛可使肝细胞内线粒体受损，而使肝细胞对脂肪的分解功能低下，此时机体可动员皮下脂肪组织的脂肪酸向肝内转移，致使血清TG含量增高。本实验结果表明：模型组与正常组、东宝肝泰组、悦肝胶囊组相比较血清TG含量均有显著差异，P＜0.01；组织化学染色显示损伤组肝细胞内可见较多的桔红色脂滴沉着，其余各组均见少量脂滴。说明悦肝胶囊对肝脏脂质代谢起到一定的调节作用，可能主要通过悦肝胶囊中的丹参促进了脂肪在肝中的氧化作用，从而降低了肝脂的含量［5］。ALT主要分布于线粒体内，且其活性是肝细胞损害的敏感指标［6］。当肝组织发生损伤或炎症时，因能量障碍而致细胞膜通透性增加，使肝细胞内的转氨酶释放入血引起血清转氨酶活性升高，并在一定程度上反映肝细胞坏死和损伤程度［7］。悦肝胶囊可明显降低酒精所致肝损伤的ALT升高，具有恢复肝功能作用。